背景概述

T7 RNA 聚合酶是一种源自噬菌体 T7 的 99kDa 单亚基蛋白，是一种依赖 DNA 的 RNA 聚合酶，承担着关键的转录功能。与细菌 RNA 聚合酶相比，T7 RNA 聚合酶对识别序列具有更高的特异性和转录效率，因此在科学研究及商业开发中广泛应用。得益于其显著的高活性及高保真度，T7 RNA 聚合酶非常适合于体外 RNA 的生产，尤其在 mRNA 药物的制造过程中发挥着核心作用。

在 mRNA 药物的生产流程中，步骤包括基因合成、质粒 DNA 发酵、质粒 DNA 纯化、mRNA 合成、mRNA 纯化以及 LNP 包封纯化和制剂分装。在这些步骤中，以线性化质粒 DNA 为模板，T7 RNA 聚合酶作为主要原料进行的酶促反应至关重要。在 IVT 过程中，RNA 聚合酶从 DNA 模板转录 RNA。然而，T7 RNA 聚合酶的残留会被视为生产工艺相关的杂质，可能与 mRNA 一同通过 LNP 包封进入细胞，从而诱导炎症和适应性免疫反应，进而影响 mRNA 的稳定性。因此，需要更为强大的评估方法来检测其残留，确保最终产品的质量和安全性。

相关法律规定

根据 CDE 发布的指导原则《新型冠状病毒预防用 mRNA 疫苗药学研究技术指导原则（试行）》，生产过程中的各个环节均需进行严格的过程控制检测，包括加帽率、mRNA 序列完整性和准确性、纯度、浓度及副反应产物的浓度等。目前，针对工艺中残留的蛋白质，nanoorange 是一种新型荧光染料，能够检测总蛋白含量。但需注意的是，nanoorange 检测的结果包括所有的蛋白残留，这其中也包括 T7 RNA 聚合酶。因此，对 T7 RNA 聚合酶的精准监测成为保证 mRNA 药物质量的关键。

美国药典（USP）在《mRNA 疫苗质量分析方法-指南草案》中强调必须全面控制生产工艺的质量，确保产品的安全性和有效性。指导原则明确规定要检测相关杂质，如 dsRNA、DNA 模板及 T7 RNA 聚合酶的残留。这一规定首次对单酶蛋白残留提出了具体要求，进一步强化了对 mRNA 药物加工过程中杂质的监管。

mRNA 药物关键酶残留检测利器

尊龙凯时依托《mRNA 疫苗质量分析方法-指南草案》推荐的方法，自主研发了 T7 RNA 聚合酶残留检测试剂盒（ELISA 法）。该试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法，能够准确测定 T7 RNA 聚合酶的残留量，为了解工艺杂质提供了更为详尽的信息。

检测流程：

操作简便——只需一步加样，一次洗板，即可进行显色；检测时间短，总反应时间为 1h15min，且无需使用振板系统，同时，试剂盒标准曲线线性良好（R² > 0.99）。检出限低于 0.1 ng/ml，定量限可达到 0.25 ng/ml，测值 CV 低于 10%，回收率在 80%-120% 范围内。此外，该试剂盒特异性识别 T7 RNA 聚合酶，其他 IVT 工具酶对测值无干扰，表现出优良的抗干扰性能及适配性。

通过尊龙凯时的试剂盒，可对不同工艺阶段中 mRNA 样本的 T7 RNA 聚合酶残留进行高效、准确的监测，确保产品质量的同时提升生产效率。