紫外-可见吸收光谱法，也称为紫外-可见分光光度法，是一种用于研究分子在190nm至750nm波长范围内的吸收特性的分析方法。这一方法的基础在于溶液中物质分子对光的选择性吸收。紫外-可见吸收光谱的形成源于分子的外层价电子跃迁，其吸收光谱被视为分子光谱的一种带光谱形式。

实验目的

1. 学习紫外分光光度法在蛋白质含量测定中的原理；
2. 掌握紫外分光光度法的实验技能；
3. 熟悉UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用方法，并了解其主要结构。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法是通过分析分子在特定波长范围内的吸收特性来进行定性和定量分析。定性分析通常采用光谱比较法，通过比较未知样品与已知样品在吸收峰数目、位置、强度和形状的差异来进行识别。定量分析则依据朗伯-比尔定律：A=lg(I0/I)=εbc，在特定波长下，物质的吸光度与其浓度成正比。因此，通过测量溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出其中物质的浓度。

紫外-可见分光光度计

本实验使用的紫外-可见吸收光谱法中的分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器及信号显示器五个部分组成。光源发出的光经单色器分光后，得到特定波长的光进行样品分析。该过程中使用钨灯用于可见光区域，氘灯用于紫外光区域。通过测量样品的吸光度，可以实现对蛋白质含量的精准测定。

实验步骤

1. 准备工作：
启动计算机及分光光度计，选择测量项目并进行校零。制作标准曲线以备后续分析。

2. 测量工作：
通过稀释标准蛋白质溶液并测定其在280nm处的吸光度，以建立浓度和吸光度之间的关系。同时测定待测蛋白质溶液的吸光度，进行平行实验以确保准确性。

数据处理

根据实验数据绘制吸收曲线，计算最大吸收波长及标准曲线。对所得数据进行统计分析，最终确定样品中的蛋白质浓度。经过计算，蛋白质的含量结果为0641±0.088mg/mL，在允许误差范围内。

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