尊龙凯时提供的人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2培养手册，介绍了细胞的生长条件、处理步骤以及注意事项，以确保您的研究顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基+10%胎牛血清(FBS)+1%双抗

传代方法：建议第一次以1:2的比例进行传代。每2天更换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以用于对比培养。如果对比培养效果不佳，推荐直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞在达到良好的生长状态后，请用完全培养液灌满瓶子并密封。这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精消毒整个细胞瓶，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。建议在显微镜下观察细胞的生长情况并拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片视为状态良好。（注意，放入培养箱时需松开瓶盖，传代后建议使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基，以进行对比培养。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当培养瓶中细胞未超过80%汇合度时，请将培养基收集至离心管中，保留5ml培养基并放入37℃、5% CO2的孵箱中培养。若细胞密度超过80%，请进行以下传代步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞的消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻拍培养瓶并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并吸出，再将悬液转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清后加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，必须在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。建议您按照以下方法操作：将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行对比培养，然后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，再消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。离心后，弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬，根据1:2的比例进行分瓶传代并补充新的完全培养基。

五、售后条款

1）细胞问题可重发的情况及标准

1. 运输过程中出现的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液漏液等，均可重发。
2. 如收到细胞后48小时内发现污染，需提供真实实验结果方可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时及干冰发货的细胞复苏后24小时内大部分细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，才可重发。
4. 对于干冰发货的细胞在复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时并未开封而出现污染的情况，也可重发。
5. 如收到的细胞在7天内通过台盼蓝染色法鉴定活性出现问题，经核实后可重发。
6. 收到细胞后当天以及第2、3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。
7. 4-7天内如出现问题需提供前3天的照片及操作详细步骤，若经技术人员确认问题属于我方责任，则可重发。若责任划分在双方，则按照合同价的50%进行收费重发。

2）细胞问题不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染情况不予重发。
2. 因客户操作不当导致细胞状态不良的情况不予重发。
3. 使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不良的不予重发。
4. 未提供细胞培养前3天的照片则不予重发。
5. 细胞培养期间有其他处理情况的不予重发。
6. 收到细胞2天内未告知情况的不予重发。
7. 其他情况将视具体情况而定。

选择尊龙凯时，助您在细胞培养及研究中获得高质量的细胞资源与服务。